Dermatófitos são fungos queratinofílicos e queratinoliticos capazes de invadir colonizar e causar lesões em tecidos ricos em queratina, como epiderme, pelos e unhas. Essa infecção fúngica, denominada de dermatofitose, é uma das zoonoses mais prevalentes do mundo com alto ônus econômico. O tratamento com antifúngicos orais e tópicos, como terbinafina e azóis, é essencial para prevenir a transmissão. No entanto, a resistência fúngica ao tratamento convencional evidencia a necessidade de desenvolver novas estratégias terapêuticas para o manejo dessa dermatopatia. Nesse contexto, as delta-endotoxinas produzidas por Bacillus thuringiensis apresentam um mecanismo de ação que desempenham um controle fúngico, representando uma alternativa segura e eficaz para o manejo dessa infecção.Portanto, o presente estudo teve por objetivo otimizar a produção e encapsular delta-endotoxinas com atividade antifúngica contra fungos patogênicos associados a dermatofitose animal. Foram avaliadas a concentração de açúcares redutores em meio de cultura à base de palma forrageira necessária para o desenvolvimento de Bacillus thuringiensis var. israelensis. Com base nos resultados obtidos, foi realizado um planejamento fatorial para suplementar com minerais o meio de cultura, visando otimizar a produção de delta-endotoxinas com maior toxicidade contra Microsporum canis, Microsporum gypseume Trichophyton mentagrophytes. As toxinas produzidas no meio de cultura otimizado, baseado em palma forrageira suplementada com MnSO₄ e K₂HPO₄, e no meio de cultura Luria Bertani (LB) foram avaliadas quanto a atividade antifúngica. Para tanto, foi utilizado o protocolo CLSI 38-A2 determinando-se a concentração mínima inibitória (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM). As delta-endotoxinas produzidas no meio de cultura a base de palma apresentaram maior toxicidade em comparação as produzidas no meio LB, resultando em CIM de 0.06 a 0.13 µg-mL e 0.98 a 1.96 µg-mL, respectivamente. Para o CFM os valores obtidos foram de 0.06 a 0.26µg-mL no meio de palma e 1.96 a 3.92 µg-mL no meio LB. Dessa forma, conclui-se que a utilização de meio de cultura alternativo promove a produção de delta-endotoxinas com maior atividade antifúngica, apresentando eficácia contra os agentes etiológicos M. canis, M. gypseum e Trichophyton mentagropytes.