As leishmanioses são zoonoses causadas por protozoários intracelulares obrigatórios que estão agrupados e classificados em dois subgêneros: o subgênero Leishmania e o subgênero Viannia. Diferentes espécies de mamíferos são consideradas hospedeiros primários, como os animais silvestres, domésticos e o homem, onde o cão é considerado como o principal reservatório em áreas urbanas brasileiras. Cães acometidos pela Leishmaniose Canina (LC) podem permanecer assintomáticos, mas a maioria dos animais doentes apresenta sintomatologia das mais variadas. Por isso, nosso objetivo foi avaliar os desafios no diagnóstico da LC, comparando a sensibilidade, especificidade, precisão, invasividade dos testes diagnósticos, bem como o custo-efetividade dos testes em diversos tipos de amostras biológicas. O estudo foi realizado no Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) que está localizado no Recife, Pernambuco, na região Nordeste do Brasil. Inicialmente, como teste triagem, foram realizados testes sorológicos para leishmaniose visceral (DPP Biomanguinhos, ELISA e/ou RIFI) e, posteriormente, 41 cães com diagnóstico de LC confirmado pelo teste parasitológico, foram selecionados para participar da pesquisa. Na ocasião, foram realizadas coletas de material  biológico desses animais, com ou sem sintomatologia clínica. Foram coletadas, sempre que possível, amostras de perfil lacrimal, swab conjuntival, sangue, pele, biópsia de medula óssea e punção aspirativa de linfonodo. A triagem foi realizada através do DPP, com amostras de soro. O diagnóstico parasitológico foi realizado em amostras de medula óssea, pele e linfonodo e o molecular foi realizado nas amostras oftálmicas.