O Brasil possui diversas atividades economicamente rentáveis, dentre elas destaca-se o eixo agropecuário. A criação de galinhas (Gallus domesticus) para obtenção de produtos de origem animal é executada em variados níveis de tecnificação, sendo as aves particularmente expostas à agentes infecciosos quando criadas em ambiente de vida livre em contato direto com o solo. Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório de distribuição mundial e capaz de parasitar diversas espécies homeotérmicas, e que apresenta grande importância devido seu potencial zoonótico. Considerando a baixa tecnificação de ambientes de criação comercial familiar de galinhas que muitas vezes possibilita o contato do hospedeiro definitivo de Toxoplasma gondii com galinhas de criação doméstica, é importante avaliar a circulação deste parasito nessa população de animais e, em especial, a sua viabilidade. Objetivou neste estudo, isolar e identificar T. gondii a partir de tecidos de galinhas domésticas criadas de forma extensiva e destinadas ao consumo humano. Foram coletadas amostras de sangue e tecidos de 25 galinhas destinadas ao abate. Inicialmente utilizou-se como triagem, a técnica de Imunofluorescência Indireta (IFI) para detecção de anticorpos anti -T. gondii. Os animais positivos no ponto de corte 16 tiveram seus tecidos (encéfalo, coração e fígado) submetidos ao Bioensaio em modelo murino, utilizando camundongos da linhagem Swiss-Webster. Os camundongos inoculados foram avaliados por um período de 45 dias, e no trigésimo dia pós-inoculação foi coletada amostra de sangue de cada camundongo inoculado para detecção de anticorpos anti-T. gondii na IFI. Os animais foram eutanasiados no dia 45 p.i. e aqueles positivos no ponto de corte 16 tiveram o encéfalo avaliado para a pesquisa de cistos de T. gondii e posteriormente inoculados em cultura in vitro de células MA-104 (ATCC® CRL-2378.1). Alíquotas de tecido dos camundongos e de cultura celular foram submetidas a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para confirmação d por meio da detecção do gene ITS-1. Foi observada uma frequência de 68,00% (17/25) de anticorpos anti-T. gondii nas aves avaliadas, as quais deram origem a uma soroconversão de 64,70% (22/34) nos camundongos inoculados. Foram obtidos 07 isolados de T. gondii confirmados por ensaios moleculares, dos quais 02 isolados foram mantidos com sucesso em cultivo in vitro.  A partir dos resultados obtidos, relata-se a presença e viabilidade de cistos de T. gondii em galinhas destinadas ao consumo humano. Tal ocorrência reflete o status de contaminação ambiental, fornecendo dados referentes a circulação de um agente zoonótico de severa importância para saúde pública.