Banca de DEFESA: STELIANE LIMA SANTOS

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : STELIANE LIMA SANTOS
DATA : 28/11/2022
HORA: 14:00
LOCAL: PPGBA UFRPE - meet
TÍTULO:

Produção, purificação integrada de proteases com atividade fibrinolítica por fungos do gênero Rhizopus e sua caracterização bioquímica

PALAVRAS-CHAVES:

Rhizopus arrhizus, SDFA, Protease fibrinolítica, Purificação

PÁGINAS: 116
RESUMO:

Enzimas com atividade fibrinolítica são obtidas de diferentes fontes e possuem a capacidade de degradar a fibrina, o principal componente proteico dos coágulos sanguíneos. O acúmulo de fibrina nos vasos pode gerar trombose, uma doença que ocorre quando há um desequilíbrio no sistema hemostático. Nesse sentido, o objetivo deste artigo foi selecionar fungos filamentosos do gênero Rhizopus, produzir por proteases fibrinolíticas por fermentação submersa e extrair por sistema de duas fases aquosas (PEG/Citrato) e fermentação extrativa, além de caracterizar bioquimicamente a enzima. Para a seleção foi realizada uma fermentação submersa com fungos do gênero Rhizophus. Em seguida um planejamento fatorial 2³ completo para determinar as melhores condições de produção. A influência das variáveis tipo de substrato (TS), concentração do substrato (CS) e concentração de glicose (CG) foram avaliadas sobre a produção da protease fibrinolítica. A enzima produzida foi extraída por sistema de duas fases aquosas (SDFA) constituído de polietilenoglicol (PEG) e citrato de sódio, sendo realizado de acordo com um planejamento fatorial 2⁴, para avaliar a influência das variáveis: massa molar de PEG (MPEG), concentração de PEG (CPEG), concentração de citrato de sódio (Ccit) e pH, sobre o coeficiente de partição (K), recuperação(Y%) e fator de purificação (FP). Em seguida a enzima foi caracterizada em parâmetros bioquímicos cinéticos. Um planejamento fatorial 2⁴ também foi realizado para avaliar a influência de MPEG, CPEG, Ccit e pH sobre o K e Y na fermentação extrativa. A protease fibrinolítica de Rhizopus arrhizus UCP 1605 foi produzida nas condições de 3% de soja, e 0,5% de glicose, sob agitação de 120 rpm, a 30ºC por 96 horas de fermentação submersa, apresentando uma atividade proteásica de 10,37 U/mL e uma atividade fibrinolítica com um halo de 31 mm, correspondendo a uma atividade de 850,60 U/mL. Quanto à extração em SDFA, os melhores resultados foram obtidos no ensaio formado por PEG 8000 g/mol 24,0 % (m/m), 15 % (m/m) de citrato de sódio e pH 8. Nesta condição a enzima particionou preferencialmente para fase rica em PEG, com um K de 1,58, FP 4,07, Y de 97,0% e uma atividade fibrinolítica com um halo de 16 mm, correspondendo a uma atividade de 44,39 U/mL. No processo de fermentação extrativa a enzima particionou para ambas as fases, tendo a melhor condição no ensaio composto por PEG 8000 g/mol, na concentração de 20%, 15% de citrato e pH 8,0, apresentando um K de 2,4 recuperação de atividade (Y) = 71,5% e 3,83 U/mL de atividade proteásica. A enzima presente no extrato enzimático e no SDFA apresentaram temperatura ótima de 50ºC e pH ótimo 8. Quanto aos parâmetros cinéticos a enzima apresentou constante de Michaelis Menten (K_m) de 4,06 mg/mL com velocidade máxima de 45,05 U/mL. Esses resultados demonstram o potencial da produção de Rhizopus arrhizus UCP 1605 em fermentação submersa e dos processos de extração da protease fibrinolítica e sua possibilidade para ser explorado em aplicações industriais como candidatos a agentes trombolíticos. 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - TATIANA SOUZA PORTO
Externa à Instituição - AMANDA EMMANUELLE SALES CONNIFF
Externa à Instituição - CAMILA SOUZA PORTO - UFAL
Externa à Instituição - MARLLYN MARQUES DA SILVA - UFRPE
Externo à Instituição - THIAGO PAJEÚ NASCIMENTO - UFPI