DESENVOLVIMENTO DE MÉTODOS ELETROANALÍTICOS PARA DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DOS BIOMARCADORES 7-METIL-GUANINA E 3-METIL-ADENINA, UTILIZANDO TÉCNICAS VOLTAMÉTRICAS DE PULSO
Metilação do DNA, Biomarcadores, 7-metilguanina, 3- metiladenina, Voltametria de Pulso Diferencial, Eletrodos Impressos de Carbono.
A metilação do DNA é um processo epigenético crucial que tem um papel essencial na regulação da expressão de genes. No entanto, erros na metilação ou na reparação do DNA podem levar a mutações e vêm sendo associados a diversas doenças humanas, incluindo diabetes, Alzheimer, doenças neurodegenerativas e vários tipos de câncer. Este trabalho teve como objetivo desenvolver métodos eletroanalíticos para a identificação e quantificação de espécies metiladas do DNA, 7-metilguanina (7-mGua) e 3-metiladenina (3-mAde), utilizando técnicas voltamétricas de pulso, como voltametria de pulso diferencial (DPV) e a voltametria de onda quadrada (SWV). Foi investigado a resposta eletrocatalítica simultânea da 7-mGua e 3-mAde sobre o eletrodo impresso de carbono (SPCE) funcionalizado anodicamente (aSPCE) por DPV. A 7-mGua e a 3-mAde foram oxidados em valores de potenciais distintos, em meio ácido (pH = 4,5) a 7-mGua foi oxidada em E = 0,81 V e a 3-mAde em E = 1,18 V e em meio neutro a 7-mGua em E = 0,70 V e a 3- mAde em E = 1,01 V, indicando excelente separação e a possibilidade de detecção simultânea entre essas espécies. Diferentes fatores experimentais foram então investigados para o desenvolvimento de um método eletroanalítico para quantificação simultânea da 7-mGua e 3-mAde por DPV e aSPCE, tais como a composição e pH do eletrólito suporte aquoso, adsorção e influência de possíveis interferentes (guanina, adenina, timina e citosina). Nas condições otimizadas o método alcançou em meio ácido (pH = 4,5) uma curva analítica para determinação da 7-mGua na faixa de 1,00–8,00 μmol L−1 (r = 0,997) e limite de detecção (LOD) de 0,63 μmol L−1 ; para 3-mAde de 1,00 a 8,00 μmol L−1 (r = 0,997) e LOD de 0,61 μmol L−1 . Em meio neutro os dados analíticos alcançados foram da 7-mGua na faixa de 0,50–5,00 μmol L−1 (r = 0,995) e LOD de 0,63 μmol L−1 ; para 3-mAde de 5,00 a 10,00 μmol L−1 (r = 0,996) e LOD de 0,71 μmol L−1 . Foi então proposto um novo método eletroquímico sensível, seletivo e rápido para detecção e quantificação simultânea dos biomarcadores 7-mGua e 3-mAde utilizando DPV e um aSPCE. Foi também explorado a possibilidade de detecção e quantificação da 7-mGua sobre eletrodos sólidos convencionais de platina e ouro.